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鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的鑒定與應(yīng)用

 更新時(shí)間:2020-04-22    點(diǎn)擊量:1025
   鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體存在于谷物、堅(jiān)果、棉花籽及其他食品或飼料中,具有很強(qiáng)的致癌性,對(duì)人和若干動(dòng)物具有強(qiáng)烈的毒性,其毒性作用主要是對(duì)肝臟的損害。本抗體為黃曲霉毒素B1單克隆抗體,該抗體可應(yīng)用于ELISA、膠體金、免疫親和柱層析等免疫檢測(cè)。
  鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的鑒定
  (1)亞類(lèi)鑒定:收集細(xì)胞培養(yǎng)上清,用免疫雙擴(kuò)散法鑒定免疫球蛋白亞類(lèi)。
  (2)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清及腹水效價(jià)測(cè)定:用濃度為2.5mg/L的AFB-OVA包被酶標(biāo)板,用間接ELISA法分別測(cè)出雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清及腹水效價(jià)。
  (3)抗體親和力常數(shù)測(cè)定:采用下面公式計(jì)算親和常數(shù)Ka=(n--1)/(nA'-An).
  Ka:相對(duì)親和常數(shù),A:包被抗原濃度為Ap時(shí)的半數(shù)吸光度,Ab:包被抗原濃度為Ag時(shí)的半數(shù)吸光度,n:Ag'與A。的比值
  (4)抗體對(duì)標(biāo)準(zhǔn)毒素的靈敏度:首先確定3B3抗體的ELISA的反應(yīng)條件,然后采用間接競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定不同濃度的AFB1對(duì)抑制后的A值,抑制率=A/AoX100%,其中AO為優(yōu)化條件下的吸光值繪制抑制率曲線,以抑制率50%時(shí)的AFB1的濃度為抗體檢測(cè)AFB的靈敏度。
  (5)抗體特異性檢測(cè):采用間接競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定3種McAb與黃曲霉毒素Br,G,G2,M,的交叉反應(yīng)。
  鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的應(yīng)用
  將純化濃縮后的抗體與羧基微球在4C條件下偶聯(lián)14h,然后填充親和柱,將一系列濃度的黃曲霉毒素B標(biāo)樣過(guò)親和柱,用75%甲醇洗脫后,用熒光光度計(jì)檢測(cè)單克隆抗體免疫親和柱截留的黃曲霉毒素B1。
  
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